比较体外释放测试使用弗兰兹扩散细胞Luliconazole % 1奶油,参照药物产品

皮肤是一个有价值的路由管理药物。然而,局部应用面临的挑战是将一个给定的剂量时病人皮肤防止外来物质的吸收。因此,药物有效性不同活性成分释放车辆,和皮肤的经皮吸收后管理。为此,分析活性药物成分的速度从皮肤释放药物管理局已经成为半固体制剂的关键性能数据。尽管多年来在文献中,弗朗茨细胞扩散测试奶油产品最近发展成为一个主要的工具用于体外释放测试(IVRT)。执行摘要IVRT Bilconazol 1%奶油(Bilim制药、土耳其)包含活性成分Luliconazole,使用Teledyne汉森的凤凰手动扩散测试系统。观察药物释放率与PBS / 6小时:乙醇受体介质在32ºC 600 rpm搅拌杆的速度。IVRT后,用于高效液相色谱法(HPLC)分析样品。统计参考产品之间的比较是根据EMA的指导方针。结果证实,之间没有统计上的显著差异测试和参考产品。 Validation studies also performed to evaluate the influence of the different parameters of the Franz diffusion cells.

局部产品的全球市场预计到2025年达到1298亿美元,在2019年,它的市场份额最高应用程序路线[1]。尽管忽略支持口服和注射路线,等半固体剂型软膏、乳霜、凝胶,贴和乳剂具有独特的优势,如避免代谢转变,病人的依从性、易用性和减少副作用引起的外部管理[2,3]。由于控释的挑战和活性化合物的剂量精度,实现其独特的配方组成和要求可以复杂的半固体剂型。从而使制药公司更关注皮肤交付系统。
半固体剂型需要综合示范的扩展版本控制的临床试验。然而,这些试验的持续时间和成本使他们不适合常规的控制方法(4、5)。因此,体外测试常被用来保证性能在实验室和检查配方的可行性。
体外释放测试(IVRT)使获得一致的交付数据半固体产品的活性成分。欧洲药品局(EMA)质量方针和等效局部产品[6]和美国药典(USP)[7]半固体药物产品——性能测试提供程序确定半固体剂型的药物释放。然而,皮肤的复杂性质,制定和应用过程的变化显著影响释放率,和导游不能解决这种多样性呈现单一程序。一般的指导方针不提供特定于产品的协议来演示等价。
本文旨在提出IVRT研究Bilconazol 1%霜用Teledyne汉森的凤凰手册扩散测试系统(图1)。足够的药物运输的样品通过膜实现对释放速率限制的影响。关键参数进行评估,开发IVRT方法用高效液相色谱法(HPLC)进行验证。成功IVRT测试产品之间进行比较,通过统计分析来证明参考产品的参数讨论了EMA准则[6]。尽管已经有这样的验证研究,这项研究可以揭示各种新的应用程序。

图1所示。Teledyne汉森的凤凰手动扩散测试系统。

材料和方法

2.1药物产品
Bilconazol奶油1%,安慰剂,制定不同的面霜含有0.5%和2%的浓度在Bilim药品生产(盖布泽、土耳其)Luzu奶油1%(美国Valeant 8116357)作为参考产品的验证方法。
图2。Luliconazole分子[8]。
2.2。IVRT系统
IVRT研究使用凤凰DB - 6干燥传热系统(59-201-101,汉森的研究合作,美国),符合USP规范[7]。商用纤维素酯膜(0.45µm, 10401606, A29437704,通用电气医疗集团)研究了作为药物的模态合成膜扩散。受体的媒介选择是磷酸盐缓冲剂(pH值7.4)含有50% (v / v)乙醇。系统保持在32±0.5°C的旋转搅拌速度600 rpm在整个实验过程。大约400毫克的半固态产品是放置在膜和测试就开始了。然后采集细胞的受体间使用注射器每隔一小时超过6小时。撤回成交量调整采样臂的填补马克用温热的股票受体媒介。一组6细胞在一起在一个单一的运行操作,为每个运行,两个产品相比ABABAB形式与另一种模式,客观的比较[9]。
2.3 IVRT计算方法
对于每个单元格,撤回Luliconazole样本分析HPLC-UV (e2695,联盟公司)在277 nm波长。移动阶段使用权力平等主义的条件25°C样品盘温度和30°C列温度比10:90 10µL的注射量。流动相的制备0.79 g在1000毫升蒸馏水醋酸铵,透过0.45µm过滤和脱气。脱气和作为流动相乙腈为b Luliconazole是从对称筛选了C18柱(250 x4.6毫米,5µm列,水域,美国)在1.5毫升/分钟的流量。集中值获得毫克/毫升被转换为毫克/ cm2,考虑到细胞体积,校正系数和有效扩散面积。对于每一个细胞,药物释放的数量在每个采样时间确定和累积释放量是策划反对√t根据Higuchi Eq (1) (Higuchi, 1961)。
Q = k×√t (1)
Eq。(1), Q(毫克/ cm2)是单位面积上的药物释放的数量,t(小时)和k是斜率时,这是一个衡量药物释放的速度。平均每次运行的6斜坡的剂型的药物释放速率。
2.4统计分析
合格IVRT方法基于EMA指南[6]的方法6分。相似的产品测试,统计分析进行了使用方差分析和t检验的显著性水平学生p < 0.10。12个样品的测试和参考产品被用来证明等效为指定的[6]。接受的另一个参数的线性累积的活性物质释放量与时间的平方根。
2.5验证参数
HPLC-UV方法验证参数Luliconazole 1%奶油包括特异性、选择性、线性、范围、准确度、精度限制的资格,鲁棒性、稳定性和系统适用性。系统适用性测试时也表现的相对标准偏差标准溶液超过2.0%或100%欧洲药典(EP)板数低于2000。
2.5.1。特异性
可能的干扰峰,可能是由于受体介质,研究了膜,或安慰剂进行IVRT研究空白的受体中和安慰剂奶油。在每次运行、媒介和安慰剂必须自由的干涉luliconazole的保留时间。
2.5.2。选择性
确定luliconazole释放率,不同浓度配方根据他们的释放率进行评估。释放率作为药物浓度的函数绘制精确的比例变化和被报道为线性(R2≥0.90)。
2.5.3。线性
药物试验标准的解决方案之间的六种不同浓度150%的工作定量限浓度和准备。线性回归分析计算R2值检查要大于0.995。
2.5.4。精度
IVRT样品的准确性,安慰剂奶油与luliconazole定量限浓度上升,一式三份的50%、100%和200%。经济复苏应在95%和105%。定量限,结果不应该偏离超过±20%。此外,相对标准偏差应低于5%。
2.5.5.Precision
测试方法的精度,计算斜坡之间的变化,检查是否为在国际米兰6分不到2%。然后用测试和可重复性研究参考产品的释放率在90%置信水平和比较。最后,对于中等精度,RSD的释放率的两种不同的运行相同的批处理是由不同的运营商在不同的日子里,确保它没有超过10.0%。
2.5.6。鲁棒性
色谱系统和IVRT系统,通过运行一个不同的参数测试IVRT测试方法参数的小扰动。两列温度变化(27ºC和33ºC)和两个流动相比例(流动相:B比率5:95和15:85)对色谱系统进行更改。也混合率变化(540 rpm和660 rpm)和受体温度变化(30ºC和34ºC) IVRT系统进行改造。预期结果不偏离超过15%。

结果与讨论

两个配方是追究他们的释放特征之间的差异。第一步,分析建立了luliconazole HPLC-UV方法。膜选择混合纤维素;商业可用性和其惰性,使高导磁率最少的可能的扩散阻力,因为关键是膜没有物理或化学与配方的交互,可能导致影响IVRT结果[10]。
关键参数之一是确保没有引入泡沫细胞。因此,它是在实验开始前德加中必不可少的。同时,半固态产品传播到整个空间膜消除diffusion-based变化,由于膜被分配到把产品分开受体介质而使扩散之间的通信。
系统适用性参数检查EP板数和相对标准偏差的% 100标准的解决方案。结果发现在7128年rsd为0.28%。
3.1验证参数
3.1.1。特异性
可能干扰峰被进行调查两个独立IVRT研究空白膜和安慰剂。峰纯度检查在保留时间检测区域,通过了测试。
3.1.2。选择性
三种不同浓度的Luliconazole奶油IVRT结果的评估,和他们的释放率是策划反对药物浓度。线性发现0.918,满足EMA规范[6](图4)。

3.1.3。线性
药物试验标准解决方案6不同浓度为20%,50%,70%,100%,120%的定量限浓度和工作准备。线性回归分析计算R2值被发现是0.999大于0.995(图5)。

图5。6个不同浓度的线性回归曲线。
3.1.4。精度
精度分析与容量的玻璃瓶一式三份的安慰剂通过添加luliconazole奶油和稀释的媒介。然后,50%,100%,200%,比例的工作定量限浓度添加到烧瓶。除了定量限浓度,观察到的RSD为1%以下。定量限,发现平均4.9%,验收标准中。
3.1.5。精度
观察注射高效液相色谱法之间的差异,六个连续的运行进行分析,和RSD为0.23%,在验收标准。可重复性研究使用测试和参考产品的释放率。学生学习任务和ANAVO统计分析用于产品相似度测试。结果在90%置信区间范围内指定EMA指南[6],因此通过了测试(表1)。

表1。释放实验结果供参考和测试产品。
参考测试结果
R2 0.974 - 0.998
k(µg /厘米2 / h0.5) 423.67 - 377.07
0.17 t(α= 0,10)
方差分析(α= 0,10)0.52

此外,IVRT两种不同的测试结果,属于同一批次根据他们的释放率统计分析发现相同,这证明了运营商之间没有差异(RSD为0.0001%)。
3.1.6。鲁棒性
色谱系统的变化,列温度变化进行了27ºC和33ºC。这是观察到33ºC 377.65(µg /厘米2 / h0.5) k值增加0.15%和27ºC 376.23(µg / cm2 / h0.5) k值RSD为0.22%减少。流动相比例是另一个参数对色谱系统的变化。流动相:B比率改为5:95和15:85。在这两种情况下,k值与377.03相比分别下降了1.6%和0.39%(µg / cm2 / h0.5) k值。
IVRT系统变化,混合率首先尝试在540 rpm和660 rpm。变化,这些变化分别为6.25%和5.92%,偏差率低于15%。释放率高出48.2%是观察在受体2ºC更高的温度,观察释放率下降了52.2%,2ºC冷却器受体(表2)。这些结果证明IVRT混合率、柱温度和流动相变化不影响药物的数量,尽管IVRT温度条件对释放速率有很大的影响,它应该被认为是一个关键参数[11]。

表2。IVRT计算结果(R2、释放率和%的差异)在不同的参数和条件。
系统参数条件R2 k %
高效液相色谱柱温度
与流动相比例27ºC, 10:90 0.998 376.23 0.22
33ºC, 10:90 0.998 377.65 0.15
30ºC, 85:15 0.998 370.99 1.60
30ºC, 5:95 0.998 375.58 0.39
IVRT受体温度
&混合率30ºC, 600 rpm 0.996 180.34 52.2
34ºC, 600 rpm 0.994 558.77 48.2
32ºC, 540 rpm 0.999 353.51 6.25
32ºC, 660 pm 0.999 399.41 5.92

4所示。结论

这份报告说明了综合研究的验证参数IVRT Luliconazole 1%霜的方法。IVRT被用作产品相似性比较方法参考和测试产品。适当的惰性和商用纤维素酯膜和PBS:乙醇受体介质在32ºC 600 rpm搅拌棒速度与扩散的细胞系统使用。跨膜扩散的luliconazole被高压液相色谱分析每小时为药物的内容。可能影响IVRT系统测定和验证参数确定。限制和验收标准是根据EMA准则[6]。
IVRT研究发现的关键参数是受体的温度环境。使用区域的温度应该考虑和任何可能的变化应该被监视,以便释放率不会导致高的效果。本文讨论的方法可以用于其他相关IVRT分析进行进一步的研究。

确认

这项工作是研发部门的支持下,分析方法开发实验室在科学分工的理事会Bilim药品。
宣言的相互竞争的利益
没有冲突要申报的东西。

引用

1。“局部给药市场,按类型(半固体(膏霜,凝胶、乳液、液体,固体,经皮的产品),路线(真皮、直肠、阴道),病人护理(家庭护理、医院、烧伤中心)COVID-19影响——全球预测到2025年”,市场和市场,PH值7545,2020年9月,网络。
2。拉博拉,Aditya Sambhaji德斯穆克,Kapileswar情郎。“半固体剂型的最新进展。“Int。j . Phar。科学。研究》5:3594 - 3608年,2014年9月01,Doi: 10.13040 / ijpsr.0975 - 8232.5 (9) .3594-08。
3所示。m .凹地,y Chourasiya, r . Maheshwari上面Tekade,”第二章——当前的赋形剂科学的发展:暗示量化各赋形剂的选择产品开发”,放置制药。刺激,Dev。Res,学术出版社,2019:29 - 83页。,Doi: 10.1016 / b978 - 0 - 12 - 817909 - 3.00002 - 9所示。
4所示。Narkar, y“局部产品生物等效性”——一个更新。制药。研究》2010年,27岁,2590 - 601。doi: 10.1007 / s11095 - 010 - 0250 - 3。
5。Olejnik, a;Goscianska, j .;诺瓦克,即“半固体剂型的活性化合物释放”。j .食品药品。肛门。2012年,101 (11),4032 - 45。doi: 10.1002 / jps.23289。
6。“草稿和等效局部产品质量方针。“欧洲药品局,CHMP QWP / 708282/2018,对人用药品委员会(CHMP), 2018年10月18日。
7所示。“半固体药物产品,性能测试。“美国Pharmacopeial约定和国家规定,1724卷,2014年8月1日。
8。四郎,博康,et al。”小说与Luliconazole短期治疗,局部抗真菌咪唑,在豚鼠模型的体癣、脚癣。“抗菌药物和化疗,美国微生物学会期刊,2012年6月;56 (6):3138 - 43,doi: 10.1128 / AAC.05255-11
9。SUPAC-SS:未经消毒半固体口服剂型,扩大和批准后的变化:化学、制造业、和控制;体外溶出试验和体内生物等效性文档;指导行业。美国卫生和人类服务部,食品药品监督管理局药品评价和研究中心(CDER)的美国华盛顿特区政府印刷局:;1997年。
10。Zatz, j·l .“从半固体药物释放:膜透性的影响对产品参数的敏感性”,制药。1995号决议12 (5),787 - 9。doi: 10.1023 /: 1016236331547。
11。Tiffner KI, Kanfer我,奥古斯汀T, Raml R,兰尼SG,罪人f“全方位的资格和验证一个体外释放测试的基本参数(IVRT)方法对阿昔洛韦膏”,5。Int J制药。2018年1月15日,535 (2):217 - 227。doi: 10.1016 / j.ijpharm.2017.09.049。