用于冷冻clxm显微镜成像哺乳动物细胞的创新阶段

Linkam科学仪器公司报告了他们在伦敦研究所、英国癌症研究所使用创新的CMS196冷冻台对哺乳动物细胞进行研究的情况。

在该杂志最近发表的一篇文章中，Ultramicroscopy(Duke et al.， 2013)， Lucy Collinson博士(LRI电子显微镜单元)，与Sharon Tooze博士(LRI分泌途径实验室)合作，在整个哺乳动物细胞中形成自噬体。在为电子显微镜准备的细胞中，这种结构特别难以捕捉，所以他们现在正在使用一种强大的新技术，称为低温软x射线断层扫描，低温- sxt，与钻石光源同步加速器的利兹·杜克博士合作。这些细胞生长在微小的金格上，并浸入液态乙烷中以保持冷冻状态。

为了找到细胞内的自噬体，它们被标记为绿色荧光蛋白(GFP)。荧光自噬体然后定位使用的技术称为相关冷冻荧光和冷冻软x射线显微镜(冷冻- clxm)。冷冻荧光显微镜使用Linkam CMS196阶段进行，然后将细胞在冷冻容器中运输到牛津郡、柏林和巴塞罗那的同步加速器进行成像。这种新的相关方法的主要优点之一是，CMS196阶段允许在实际进入同步加速器之前，在研究实验室中筛选细胞的质量和蛋白质定位。冷冻荧光显微镜和冷冻sxt的结合使科学家能够将蛋白质的功能与其接近天然状态的结构联系起来。雷电竞网址

Linkam CMS196平台是专门为解决如何将玻璃化的EM网格从荧光显微镜进入低温tem而设计的，而不会因冷凝而脱硝和污染。舞台在光学上进行了优化，可以使用高NA镜头。多达3个网格可以装入一个专门设计的盒子，用于从冷冻柜运输到直立荧光显微镜。然后使用特殊的操作工具将盒式磁带轻松加载到观看桥上。样品观察室完全干燥，低于-180ºC，而样品桥本身在-196°C。网格可以使用100X 0.75NA透镜快速有效地扫描，并使用高精度千分尺进行操作。然后将盒式磁带简单地操纵回运输装置，然后将其运送到液氮下的低温tem中。