细胞膜动态过程可视化的完整系统

卡尔蔡司介绍了用于细胞和分子生物学的激光全内反射荧光成像系统。随着TIRF的引入，对活细胞膜附近或无细胞系统盖片上的动态过程的检查才成为可能。在过去，这样的程序在技术上非常复杂，对激光束的对准非常敏感，即只有少数用户可以使用。由于TIRF成像系统的模块化设计，卡尔蔡司已经将这项新技术提供给了一大群用户。

例如，在分子水平上观察蛋白质在转运过程中的动态行为，或内吞和胞吐，在成像过程中需要较高的空间和时间分辨率。还需要与其他观察技术和潜伏期相结合，以确保在稳定的位置长期观察。

卡尔蔡斯公司的Axiovert 200倒置研究显微镜使用的激光TIRF成像系统是第一个通过快速双滤光轮和TIRF和透射光对比技术(DIC / brightfield)的组合来快速改变激光线的系统，可以使用AxioVision软件每秒连续记录两张图像对。卡尔蔡司是唯一能够将多色TIRF、外显荧光和透射光对比技术(DIC)与激光安全条件下的标本孵育相结合的制造商。样品在激光安全条件下的培养现在可以采用所有阶段(固定、加热、机械和扫描阶段)。扫描阶段的特殊好处包括更高的长期稳定性和更精确的标本定位。对于多色TIRF，可使用波长为458、488和514nm的100 mW多线氩激光。由于光学设计，TIRF效果实现了所有三个波长的单一角度设置。在波长或试样改变后，不需要重新排列。这三条激光线是大多数活性染料的理想选择，例如荧光蛋白CFP, GFP, YFP和mRFP。一项新功能是基于AxioVision软件4.5版本的TIRF对准辅助发散和TIRF角度，可以非常容易地在屏幕上对准，而不影响激光安全性。

与传统的宽场荧光不同，TIRF提供了非常高的轴向分辨率，因为激发场仅穿透100到200nm进入样品。结构可以被激发，因此只能在这个体积中可见。干扰背景荧光已经成为过去。TIRF和共聚焦激光扫描显微镜之间的主要区别是，共聚焦切片的典型厚度为400到1000nm，而TIRF方法产生的切片厚度约为。150海里。因此，只有TIRF才能产生从样品到盖片过渡(即在细胞膜处)所需的分辨率，以实现单个细胞动态过程的可视化。